V roce 1991 začala apoštolská práce Opus Dei v tehdejším Československu.

Nyní má Opus Dei v České republice a na Slovensku asi 150 členů a mnoho spolupracovníků, kteří se podílejí na různých apoštolských činnostech.

Centra v České republice

Centra Opus Dei v Praze jsou Univerzitní centrum Na Baště, Studijní centrum Pětidomí a centrum kněžských setkání Terasa, které slouží k formačním aktivitám pro diecézní kněze a bohoslovce. V Brně můžete najít Studentskou kolej U Pálavy a Kulturní centrum Brunea.

V Bělokozlech u Sázavy je Vzdělávací centrum Palouček, které je určeno pro duchovní cvičení, semináře a různé prázdninové pobyty.

Centra na Slovensku

Centra Opus Dei v Bratislavě jsou Studentský domov Dowina a Kulturní centrum Ister.

Současný Regionální vikář pro Českou republiku a Slovensko je ThDr. Ing. Manuel Lobo.